Набір CloneJET PCR Cloning Kit - удосконалена система позитивної селекції для високоефективного клонування продуктів ПЛР

Набір CloneJET PCR Cloning Kit від Thermo Scientific являє собою удосконалену систему позитивної селекції для високоефективного клонування продуктів ПЛР, напрацьованих будь-якою термостабільною ДНК-полімеразою. Також можуть бути клоновані інші фрагменти ДНК з липкими або тупими кінцями. Ідеально підходить для фосфорильованих и нефосфорильованих фрагментів ДНК. Лігування з включеним до комплекту вектором з позитивною селекцією займає 5 хвилин та дає на виході понад 99% рекомбінантних клонів. Продукти ПЛР з тупим кінцем, синтезовані за допомогою коригуючого ферменту, лігують безпосередньо у вектор клонування. У ПЛР продукті, отриманому як за допомогою коригуючої ДНК-полімерази, так і суміші ДНК-полімераз, за 5 хвилин до лігування слід створити тупі кінці за допомогою термостабільного ферменту DNA Blunting Enzyme, що входить до набору. Усі типові лабораторні штами E. coli можуть бути трансформовані продуктом лігування.

Набір CloneJET PCR Cloning Kit містить інноваційний, готовий до використання вектор pJET1.2/blunt. Цей вектор несе летальний ген, котрий кодує рестрикційний фермент та руйнується при лігуванні ДНК-вставки у сайт клонування, у результаті чого сформувати колонії можуть тільки ті бактерії, які несуть рекомбінантні плазміди. Рециркульовані молекули вектору pJET1.2/blunt, у яких відсутня вставка, експресують летальний рестрикційний фермент, що вбиває клітину господаря E. coli після трансформації. Така позитивна селекція значно прискорює процес скринінгу колоній і ліквідує додаткові витрати на blue/white селекцію.

Для зручності картування і маніпуляцій зі вставками сайт множинного клонування клонуючого вектору pJET1.2/blun містить дві розпізнавальні послідовності BglII, котрі фланкують сайт вставки. Крім того, вектор містить промотор Т7 для транскрипції in vitro та in vivo і секвенування вставки.

Основні особливості набору CloneJET PCR Cloning Kit:
• швидке ПЛР клонування усього за 5 хвилин
• висока точність – >99% позитивних клонів
• вектор з позитивною селекцією
• універсальність – ідеальний для клонування ДНК з тупими та липкими кінцями
• економічність – не потрібен дорогий blue/white скрінінг

Застосування набору CloneJET PCR Cloning Kit:
• клонування ПЛР продукту з тупими або 3'-dA кінцями до 10 000 п.о.
• клонування ДНК фрагментів, отриманих за допомогою рестриктуючого ферменту
• секвенування клонованої ДНК
• in vitro та in vivo транскрипція клонованих вставок від T7 промотора

Набір CloneJET PCR Cloning Kit містить:
yes pJET1.2/blunt клонуючий вектор
yes T4 ДНК лігазу
yes 2х реакційний буфер
yes фермент, що створює тупі кінці ДНК
yes pJET1.2 Forward праймер для секвенування (5'-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3')
yes  pJET1.2 Reverse праймер для секвенування (5'-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3')
yes контрольний ПЛР продукт
yes воду, що не містить нуклеаз
yes деталізований протокол

mail Ціни на набір CloneJET PCR Cloning Kit та професійну консультацію по Ви можете отримати, звернувшись до наших консультантів будь-яким зручним для Вас способом.

Властивiсть Значення
Фермент Лігаза
Розмір продукту 20/40 реакцій
Тип вектору pJET1.2/blunt
Метод клонування Клонування по тупим кінцям, Restriction Enzyme ⁄ MCS
Стійкість до антибіотиків Ампіцилін (AmpR)